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食用菌菌種的脱毒技術

2011-01-20  米雅農場
食用菌菌種的脱毒技術
 


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    近年來,食用菌病害甚多,至今尚無有效、專用的防治藥物應用於生產。將植物的脱毒技術應用於食用菌生產,可有效抑制病害的發生。
 
    所謂植物脱毒,是將植物莖尖生長尖端組織進行分離,將分離組織置於特定培養基中進行培養,從而獲得脱離原體病毒、病菌的新生種苗。具體到食用菌的脱毒繁種,嚴格説來,一般的組織分離並不能達到使菌種脱毒的目的,這是由於子實體已生長至中後期,攜帶病毒、病菌的概率相當高,故脱毒效果不明顯。而將食用菌尖端生長點進行脱毒,效果理想。
    具體的脱毒方法有兩種:
    1.菌絲尖端脱毒技術
   使用規格為90毫米或110毫米的培養皿。無此規格培養皿時,也可改用規格為25毫米×200毫米的大型試管,但操作不太方便。 先按常規制備母種培養基,裝入三角瓶,棉塞封口,加皮紙包封;同時將培養皿洗淨後用牛皮紙包好。二者同時進行滅菌處理。121℃下滅菌30分鐘,待滅菌鍋內壓力為零時,取出滅菌物,放入事先消毒的接種箱。打開牛皮紙包封,一手持培養皿,一手持三角瓶,利用手指調控使培養皿上蓋開啓約1~2釐米,倒入培養基液體約10~20毫升,蓋嚴。將培養皿平置,冷卻後成一光滑平面,俗稱平板 。 平板冷卻至30℃以下時,接入待脱毒菌種。接種方法:挑取米粒大小的一塊種源,接入平板邊緣。接種後置於規定温度下培養〔視品種調控温度)。當菌絲萌發至最長為2釐米時,用尖刃接種工具切取菌絲尖端1毫米左右,接入新制平板上。此為1次脱毒。一般可連續脱毒3~4次。脱毒次數越多,脱毒效果就越有保證。特別注意
    2.原基組織脱毒技術
  該技術最大程度革除了原有組織分離時子實體處於生長中後期,攜帶病毒、病菌可能性極大等弊端,真正實現了分離尖端組織的脱毒目的。具體操作為: 常規配製基料,調破氮比為30∶1。碳氮比不可小於25∶1,以免菌絲過度旺盛生長結成菌皮,不易現原基。大口罐頭瓶洗淨、備用。準備數塊又11釐米×11釐米的純棉紗布。裝料至瓶口下1釐米時,從瓶口處鋪上一層紗布,用平口螺絲刀將紗布邊緣插至瓶下,使之緊貼瓶劈。封口滅菌、接種、培養等操作按常規進行。 待菌絲髮滿瓶後,施行温差、濕差、光照等刺激,一般約7天即可現出原基。此時原基的形態是白疙瘩 。待原基高至1釐米時,即可進行脱毒分離。 將菌瓶用75%酒精擦洗後,移入已消毒的接種箱,箱內不再進行常規燻蒸。同時準備接種針(或接種釣)、多個刀片(以備交替使用),與菌瓶一同放入接種箱中,噴灑新潔爾滅以確保無菌操作。兩手用75%酒精擦洗,伸入接種箱,將刀片進行灼燒滅菌後手持冷卻。打開菌瓶封口,兩手配合用無菌鑷子取出原基。由於料面覆蓋一層紗布,故不會將基料帶出,操作方便。用刀片將原基表層削去約1毫米,然後用尖刃刀片將原基劃切,使每塊大小1毫米2左右。用接種針將分離的原基塊移入平板或大型試管進行常規培養。操作要點:一是用刀片進行削、切時,每切一刀須更換一次刀片;二是分離塊接入時須靠邊緣投放,可接在平板的邊緣或試管的最前部,一般不居中接入。

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